Effect of Rho subfamily proteins inhibition on the expression of neuronal markers in NT2 cells

NT2 cells when exposed to retinoic acid differentiate into neural cells, which extend characteristic protrusions and express neuronal markers. Differentiated cells are frequently used as a model of human neurons, but the differentiation process is rather time-consuming. NT2 cells can also extend projections when incubated with a Rho subfamily proteins inhibitor, C3 transferase. This process, being much faster than retinoic-acid-induced differentiation could be an alternative method of obtaining cells with a neural phenotype. In this thesis the presence of two neuronal protein markers, MAP2 and NeuN was tested, after NT2 cells were incubated with C3 transferase for 6 hours. The results of immunocytochemical staining against these two proteins showed that they are not present in examined cells. This suggests that morphological changes observed in NT2 cells after inhibition of Rho subfamily proteins are not necessarily a sign of neuronal differentiation.

Komórki NT2 różnicują pod wpływem kwasu retinowego do komórek o neuronalnym fenotypie, które tworzą charakterystyczne wypustki oraz wykazują ekspresję markerów neuronalnych. Są one często stosowane jako model ludzkich komórek nerwowych, jednak ich otrzymanie jest czasochłonne. Komórki NT2 mają zdolność tworzenia wypustek również podczas inkubacji z inhibitorem białek podrodziny Rho, C3 transferazą. Proces ten, istotnie krótszy niż różnicowanie z kwasem retinowym, mógłby być wykorzystany jako alternatywna metoda uzyskiwania komórek o neuronalnym fenotypie. W niniejszej pracy sprawdzano obecność dwóch markerów neuronalnych, MAP2 oraz NeuN w komórkach NT2 inkubowanych przez 6 godzin z C3 transferazą. Barwienia immunocytochemiczne z zastosowaniem przeciwciał przeciwko tym dwóm białkom wskazały na brak ich obecności w badanych komórkach. Zmiany morfologiczne obserwowane po inhibicji białek podrodziny Rho nie muszą zatem być związane z różnicowaniem komórek NT2 do neuronów.