Method of obtaining a technical preparation of beta-galactosidase from Kluyveromyces lactis yeast NRRL-Y-1118

The active preparation of β-galactosidase was obtained from yeast Kluyveromyces lactis NRRL-Y-1118 cultivated on ultrafiltrates of whey. Extraction, two-fold precipitation with acetone and ultrafiltration leads to a fivefold purification of the enzyme its activity being regained in 65%. This enzyme preparation containing whey proteins had a marked stability at 4°C.

Drożdże Kluyveromyces lactis hodowane na serwatce po ultrafiltracji z podwyższoną do 15% zawartością laktozy użyto jako źródło enzymu. Po dezintegracji komórek w homogenizatorze DYNO-MILL KDL f-my Bachofen enzym izolowano z surowych ekstraktów przez dwukrotne strącanie acetonem i ultrafiltracją (rys. 1). W wyniku takiego postępowania z 50 g drożdży uzyskano 1400 mg preparatu β-galaktozydazy o wysokiej aktywności 87000 J.A.G. (jednostek aktywności β-galaktozydazy-μmoli ONP uwolnionych z ONPG/min). W procesie oczyszczania nastąpił 5-krotny wzrost aktywności specyficznej enzymu przy jednoczesnym jego odzysku w granicach 65% (tabela 1). Uzyskany "enzym surowy" charakteryzował się złożonym składem białkowym w warunkach sączenia molekularnego na sefadeksie G-200 (rys. 2 i 3) i elektroforezy na poliakrylamidach (rys. 4). Trwałość enzymu przechowywanego w formie zliofilizowanej wzrastała wyraźnie po zmieszaniu go w stosunku 1 : 4 z białkami serwatki (tabela 2). Aktywność β-galaktozydazy w takim preparacie wynosiła 17000 J.A.G/g. W trakcie 2 lat przechowywania w 4°C utracił on jedynie ok. 16% aktywności (tabela 2).