Sensitive fluorimetric determination of protein with dibromohydroxyphenylfluorone-molybdenum(VI) comlex probe based on fluorescence quenching in non-ionic microemulsion

In this paper binding interaction between a new fluorescence probe dibromohydroxyphenyi-fluoronc-molybdenum(VI) (DBHPF-Mo(Vl) and a protein has been studied. In the presence of the cmulsifier OP microemulsion of pH 3.2 DBHPF-Mo(VI) complex binds the protein rapidly to form a stable compound of a maximum excitation wavelength (λex) of 468 nm and a maximum emission wavelength (λcm) of 527 nm. Fluorescence intensity of the probe is quenched by the protein. The magnitude of quenching is linearly proportional to the protein concentration. Under optimum conditions calibration plots for bovine serum albumin (BSA), human serum albumin (USA), and ovalburnin (Ova) have been constructed in the concentration ranges of 0∼6.00 μg mL-1, 0∼4.00 μg mL-1 and 0∼4.00 -1 , respectively. Addition of the OP microemulsion to the system during protein determination has increased significantly the sensitivity of the analysis by changing the microenvi-ronment. The corresponding detection limits of BSA, HSA and Ova were 3.4 ng mL-1, 3.6 ng mL-1 and 6.2 ng mL-1 The developed procedure has been satisfactorily applied to the determination of protein in urine.

---

Zbadano oddziaływanie nowego odczynnika fluorescencyjnego: dibromohydroksyfluoron-molibden(VJ) (DBHPF-Mo(VI) z białkiem, W obecności emulgatora OP, przy pH 3,2 mikroemulsja kompleksu DBHPF-Mo(Vl) wiąże szybko białko, tworząc trwale połączenie o długości fali promieniowania wzbudzającego 468 nm i emitowanego 527 nm. Intensywność fiuorescencj i jest tłumiona w obecności białka. Wielkość tłumienia jest liniowo proporcjonalna do stężenia białka. W optymalnych warunkach otrzymano wykresy kalibracyjne dla albuminy surowicy wołowej (BSA), albuminy surowicy ludzkiej (HSA) i owalbuminy (Ova) w zakresach odpowiednio: 0∼6.00 μg mL-1, 0∼4.00 μg mL-1. Dodatek emulgatora OP zwiększa znacznie czułość metody. Granice wykrywalności BSA. HSA i Ova wy noszą odpowiednio mL-1, 3.6 ng mL-1 and 6.2 ng mL-1 . Opracowaną procedurę zastosowano do oznaczania białka w moczu.