Opracowanie chromatograficznej metody oznaczania tlenku węgla(II) w materiale biologicznym.

Analiza krwi sekcyjnej pod kątem zawartości karboksyhemoglobiny COHb jest jednym z elementów ustalania przyczyny zgonu, szczególnie u ofiar pożarów. Szeroko stosowane w tym celu metody spektrofotometryczne niekiedy nie pozwalają na uzyskanie poprawnych wyników, szczególnie dla materiału biologicznego będącego w stanie silnego rozkładu na skutek przebiegających procesów gnilnych czy działania wysokiej temperatury np. u ofiar katastrof lotniczych. Przeprowadzone badania miały na celu zaprojektowanie metody oznaczania tlenku węgla(II) we krwi, która umożliwiłaby uzyskanie wiarygodnych wyników analizy takich próbek. Opracowana metoda wykorzystuje technikę chromatografii gazowej w połączeniu z analizą fazy nadpowierzchniowej oraz płomieniowo – jonizacyjną detekcją sygnału. Pracę badawczą podzielono na etapy związane z optymalizacją sposobu przygotowania próbek oraz sporządzenia roztworów wzorcowych, doborem właściwych warunków pomiarowych, wyznaczeniem parametrów walidacyjnych oraz porównaniem uzyskanych wyników z metodami referencyjnymi.Zaprezentowana metoda jest liniowa w całym zakresie stężeń, co pozwala na oznaczanie COHb od stężenia fizjologicznego do 100%. Cechuje ją dobra dokładność i precyzja (dla stężenia COHb równego 50% wynosi 1,2%). Przedstawioną procedurę wdrożono do użytku w Instytucie Ekspertyz Sądowych w Krakowie.

Analysis of autopsy blood for carboxyhemoglobin COHb content is one of the elements to determine the cause of death, particularly for fire victims. Widely used for this purpose, spectrophotometric methods may not provide correct results, especially for biological material strongly degraded, for example because of putrefaction, or because of high temperature fires, like in airplane crashes.This research was aimed at designing a method for the determination of carbon monoxide in the blood, which would make it possible to obtain reliable analysis results of such samples. Developed method uses gas chromatography in combination with headspace analysis and flame-ionization signal detection.Research work was split into phases, related to: optimization of method used to prepare samples, and preparation of reference solution; selection of appropriate conditions for measurement; determination of validity parameters; and comparison of obtained results with reference methods.The proposed method is linear throughout the concentration range, allowing the determination of COHb from physiological concentration up to 100%; it is characterized by good accuracy and precision (at a concentration equal to 50% COHb of 1.2%).Presented procedure has been implemented for use at the Institute of Forensic Research in Kraków.