Development and validation of HPLC - DAD method for determination of vitamins K and D3

Celem pracy było opracowanie i walidacja metody wysokosprawnej chromatografii cieczowej do oznaczenia witamin K1, K2 (MK-4), K2(MK-7), K3 i D3 obok siebie. W badaniach wykorzystano, jako fazę stacjonarną kolumnę COSMOSIL Cholester, 150x4.6 mm, natomiast fazę ruchomą stanowiła mieszanina metanolu i acetonitrylu w stosunku 90:10 (v/v). Detekcję prowadzono przy długości fali 254 nm. Szybkość przepływu wynosiła 1 ml/min, a czas analizy 40 minut. Przeprowadzona walidacja wykazała, że metoda jest specyficzna i cechuje ja dobra czułość. Metodę charakteryzuje również szeroki zakres liniowości, wysoka precyzja i dobra dokładność. Na podstawie otrzymanych wyników stwierdzono, że opracowana metoda analityczna spełnia kryteria akceptacji i może być stosowana do analizy ilościowej witamin K oraz D3 w suplementach diety.

The aim of the study was to develop and validate the method of high performance liquid chromatography for the determination of vitamin K1, K2 (MK-4 and MK-7), K3 and D3 next to each other. The chromatograph HITACHI Elite LaChrome was used in research, COSMOSIL Cholester column, 4.6 I.D.x150mm was used as a solid phase, the mobile phase was a mixture of methanol and acetonitryle at a ratio of 90:10 (v/v). The flow rate was 1 ml/min and analysis was carried out for 40 minutes. Detection was at wavelength of 254 nm. Conducted validation showed that the method is specific and it has good sensitivity. The method is characterized by high precision, good accuracy and low values of the limit of detection and quantification.Based on these results, it was found that the developed analytical method meets the acceptance criteria and can be used for quantitative analysis of vitamins K and D3 in dietary supplements.