Otrzymywanie białka VEGF-C w ssaczym systemie ekspresyjnym

VEGF-C is a member of vascular endothelial growth factor (VEGF) family. The main role of VEGF-C is stimulation of physiological lymphangiogenesis and angiogenesis. It also has the effect on pathological processes such as tumorigenesis and retinopathy. In my thesis I attempted to obtain expression of mouse recombinant VEGF-C (rVEGF-C) in mammalian cells. The first step was to clone the HBM-mVEGF-C-Histag fragment from HBM-mVEGF-C-HisTag-pENTR plasmid to pcDNA3-Neo plasmid and to pcDNA3-Tomato-ΔNeo plasmid. Subsequently HEK293 and CHO cell lines were transfected with each of the plasmids. The presence of the VEGF-C was analyzed in culture media and cell lysates using WB method.

Białko VEGF-C należy do rodziny czynników wzrostu śródbłonka naczyń VEGF, a jego główną rolą jest udział w fizjologicznej limfangiogenezie i angiogenezie. Uczestniczy też w procesach patologicznych takich jak kancerogeneza, czy retinopatie. W mojej pracy podjęłam próbę uzyskania ekspresji mysiego rekombinowanego VEGF-C (rVEGF-C) w komórkach ssaczych. Pierwszym etapem było klonowanie fragmentu HBM-mVEGF-C-Histag z plazmidu HBM-mVEGF-C-HisTag-pENTR do plazmidu pcDNA3-Neo i do plazmidu pcDNA3-Tomato-ΔNeo. Następnie linie komórkowe HEK293 i CHO transfekowano każdym z plazmidów i w ostatnim kroku metodą WB sprawdzono obecność białka VEGF-C w pożywkach pohodowlanych, a także w lizatach komórkowych.