Identyfikacja i lokalizacja czynników zaangażowanych we wczesne etapy folikulogenezy - model hodowli organotypowych

Folliculogenesis involves the recruitment and maturation of ovarian follicles. It is an important process started during fetal development which determines the initial number of follicles that later on can be capable to fertilization. A better understanding of mechanisms which regulate folliculogenesis is crucial to eliminate factors which may disturb this process and contribute to the shortening of the female fertile period leading to subsequent infertility. Exogenous androgens and anti-androgens may be one of the cause. Therefore, this study was conducted to determine whether experimentally induced androgen deficiency during in vitro culture of porcine ovarian cortical slices affects crucial factors involved in early foliculogenesis. Cortical slices obtained from ovaries of 5-6-months-old gilts were cultured for 2, 4, 6 or 8 days with the addition of testosterone (T, 10-7M), antiandrogens: 2-hydroxyflutamide (2-Hf, 1.7×10-4M) or vinclozolin (Vnz, 1.4×10-5M), separately or in combinations with T. Next we used Western Blot and Real-time PCR to analyze the expression of FSHR and growth differentiation factor-9 (GDF9) on mRNA and protein level. Our results show that expression of FSHR and GDF9 depends on the presence of androgens. We observed that the addition of testosterone increased FSHR and GDF9 expression. Our data confirmed that androgens are necessary for proper follicular development. Moreover, it was showed that androgens can influence primordial follicles transition to primary and secondary stage by altering expression of FSHR and GDF9. On the other hand, anti-androgens caused a decrease in the expression of FSHR and GDF9 since they block androgen receptors, which are indispensable for the normal course of folliculogenesis. In the light of accumulating evidence indicating the rising presence of EDCs in the environment, it seems important to establish how such compounds as Vnz influence the initiation of folliculogenesis within the ovary.

Folikulogeneza jest kluczowym procesem prowadzącym do powstania puli pęcherzyków jajnikowych, zdolnych do zapłodnienia. U ssaków ma ona miejsce w życiu płodowym bądź wkrótce po narodzinach. Folikulogeneza obejmuje dwa etapy: fazę niezależną od gonadotropin, w trakcie której rozwija się pula pęcherzyków przedantralnych oraz fazę zależną od gonadotropin, gdzie dominują stadia antralne. Jak wykazały wcześniejsze badania androgeny pełnią kluczową rolę w procesie tranzycji pęcherzyków pierwotnych w pierwszorzędowe, prawdopodobnie wywołując bezpośredni wpływ na czynniki zaangażowane w prawidłowy przebieg wczesnych etapów folikulogenezy.Materiał badawczy stanowiły eksplanty kory jajnika świni hodowane „na granicy faz” przez 2,4,6 i 8dni. Grupy badawcze stymulowano odpowiednio androgenem: testosteronem (T, 10-7M), antyandrogenem klinicznym: 2-hydroksyflutamidem (2-Hf, 1,7x10-4M), antyandrogenem środowiskowym: winklozoliną (Vnz, 1,4x10-5M) oraz T+2-Hf i T+Vnz. Ekspresję receptora dla folitropiny (FSHR) oraz czynnika wzrostu i różnicowania 9 (GDF9) zbadano, zarówno na poziomie mRNA jak białka, przy użyciu metody Real-Time PCR oraz Western Blot. Badania wykazały wzrost ekspresji obu czynników po stymulacji testosteronem, natomiast tendencję do obniżania ekspresji wykazano w grupach traktowanych: 2-Hf i Vnz. Sugeruje to bezpośrednie zaangażowanie androgenów w syntezę czynników kluczowych dla wczesnych etapów folikulogenezy na poziomie mRNA i białka. Konieczne jest przeprowadzenie dalszych badań mających na celu określenie mechanizmu działania androgenów, zwłaszcza w obecności antyandrogenów środowiskowych, w procesie dojrzewania i różnicowania pęcherzyków jajnikowych in vitro.