Optymalizacja produkcji i oczyszczanie przeciwciał formatu scFv specyficznych względem BSA

Przeciwciała to białka wydzielane przez zaktywowane limfocyty B w odpowiedzi na antygeny stymulujące układ odpornościowy. Specyficzne wiązanie antygenu przez te białka sprawia, że są szeroko stosowane w celach diagnostycznych i terapeutycznych. Nowoczesne metody inżynierii genetycznej pozwalają na modyfikacje wielkości, struktury i właściwości przeciwciał. Rekombinowane fragmenty przeciwciał formatu scFv otrzymane metodą ekspresji fagowej są często korzystniejszą alternatywą dla konwencjonalnych przeciwiciał.Celem pracy była optymalizacja otrzymywania monoklonalnych przeciwciał formatu scFv specyficznych względem BSA w komórkach Escherichia coli RosettaBlue(DE3)pLysS zawierających plazmid pET-scFv. Następnie białka scFv produkowano w wybranych, optymalnych warunkach i oczyszczano za pomocą chromatografii powinowactwa z zastosowaniem białka A. Oznaczenie stężenia przeciwciał metodą BCA wykazało, że zastosowany system ekspresyjny pozwala na wydajną ekspresję przeciwciał scFv. Niskie powinowactwo otrzymanych przeciwciał scFv względem BSA skłania do dalszej optymalizacji hodowli, modyfikacji szczepu lub plazmidu kodującego fragment scFv.

Antibodies are proteins which are produced by B cells in response to antigens which stimulate immune system. Specificity of antigen binding is commonly used in diagnostic or therapeutic purposes. Modern genetic engineering techniques enable modification of size, structure and properties of antibodies. Single chain variable fragments (scFvs) produced from phage display could be superior alternative to conventional antibodies.The main goal of this study was optimization of efficient production of monoclonal scFv specific for BSA in Escherichia coli RosettaBlue(DE3)pLys pET-scFv culture and scFv purification by A -protein based affinity chromatography. The high expression level was achieved, but optimalization of strain or plasmid is necessary due to low affinity of scFv.