Molekularna charakterystyka fitoplazm porazajacych roze w Polsce

Symptoms of shoot dieback and leaf yellowing followed by leaf chlorosis were observed in naturally infected roses 'Frisco' and 'Suela', cultivated in a commercial greenhouse in Poland. The presence of phytoplasma was demonstrated in affected plants by nested polymerase chain reaction (PCR) with R16Fl/RO and Pl/p7 primer pairs in the first round followed by a second one with RI6F2n/R2, fNrA, Pc399/p1694, R16(1)Fl/Rl and PllfArev primer pairs. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of PCR products (primed with primers R16F2n/R2) was done using enzymes Alul, Msel, Rsal and HpaII. Restriction profiles obtained with these enzymes were identical to those of reference strain AYl belonging to aster yellows phytoplasma group, subgroup l-B (16SrI-B). Nested PCR products from roses 'Frisco' and 'Suela' were sequenced. Analysis of sequences confirmed that the phytoplasma infecting those roses could be classified to aster yellows phytoplasma group, subgroup B.

Na naturalnie porażonych różach odm. Frisco i Suela w uprawie pod osłonami obserwowano chlorozę a następnie żółknięcie liści oraz zamieranie pędów. Obecność fitoplazm w różach wykazano stosując łańcuchową reakcję polimeryzacji (PCR) z wykorzystaniem starterów R16F1/R0 i P1/P7 w pierwszej rundzie PCR oraz starterów R16F2n/R2, R16(I)F1/R1, fA/rA, Pc399/P1694, Pl/fArev w drugiej rundzie PCR. Trawienie enzymatyczne produktów amplifikacji (otrzymanych przy użyciu pary starterów R16F2n/R2) wykonano stosując restryktazy AluI, MseI, HpaII i RsaI. Otrzymany wzór restrykcyjny był taki sam dla wszystkich PCR-pozytywnych prób z róż. Wzór ten był identyczny z profilem otrzymanym dla izolatu wzorcowego AY1 - fitoplazmy z grupy żółtaczki astra (16SrI). Produkty drugiej rundy PCR z róż 'Suela' i 'Frisco' sekwencjonowano z obu nici DNA. Analiza otrzymanych sekwencji potwierdziła, że obie odmiany róż porażone były tą samą fitoplazmą, należącą do fitoplazm z pierwszej grupy, podgrupy B.