Isolation and determination of taxol and cephalomannine in twigs, needles and tissue cultures from Taxus cuspidata Sieb. et Zucc.

W celu oczyszczenia i izolacji taksolu i cefalomanniny z igieł, gałązek oraz kultur tkankowych z T. cuspidata zastosowano dwie techniki przygotowania próbek: ekstrakcję w układzie ciecz-ciało stałe (SPE) oraz preparatywną chromatografię cienkowarstwową (TLC). 70% acetonitrylowo-wodne lub 80% metanolowo-wodne wyciągi dozowano na kondycjonowane SPE-mikrokolumny z chemicznie związaną fazą oktadecylową. Niepolarne związki balastowe (chlorofil, woski) zatrzymywano na złożu sorbentów, zaś zebrane eluaty zawierające taksol i cefalomanninę bezpośrednio poddawano analizie HPLC. Równolegle przygotowane próbki surowych wyciągów acetonitrylowych zagęszczano, nanoszono liniowo na płytki TLC z żelem krzemionkowym i rozwijano przy użyciu fazy ruchomej: n-heptan - dichlorometan - octan etylu (11:8:1, v/v/v). Zlokalizowane w świetle UV (γ=254 nm) wspólne pasmo taksolu i cefalomanniny usuwano z płytki a związki eluowano z żelu krzemionkowego mieszaniną rozpuszczalników: metanol - aceton (1 + 1, v/v). Wszystkie uzyskane frakcje - podobnie jak SPE-eluaty - poddano analizie ilościowej metodą HPLC.

Two sample preparation techniques - solid-phase extraction (SPE) and thin-layer chromatography (TLC) for purification and isolation of taxol and cephalomannine from needles, twigs and tissue cultures of T. cuspidata were applied. 70% acetonitrilic or 80% methanolic extracts were passed through conditioned octadecyl SPE-microcolumns. Non-polar ballast compounds (e.g. chlorophyll, waxes) were retained on the sorbent beds and the collected eluates containing taxol and cephalomannine were directly analysed by HPLC. Parallel samples of crude acetonitrilic extracts were condensed, spotted linearly on TLC silica gel preparative plates and developed with a mobile phase: n-heptane - dichloromethane - ethyl acetate (11:8:1, v/v/v). The located (under UV light, γ=254 nm) common band of taxol and cephalomannine was scraped off and compounds eluted from silica with a methanol - acetone mixture (1+1, v/v). All fractions obtained were - similarly to SPE-eluates - analysed quantitatively by HPLC.