Wykorzystanie techniki PCR-RFLP do wykrywania mutacji w kodonie 86 genu gyrA zwiazanej z opornoscia na fluorochinolony paleczek Campylobacter jejuni

Materiałem do badań było 65 szczepów Campylobacter jejuni izolowanych w Zakładzie Bakteriologii Państwowego Zakładu Higieny w latach 2003-2005 z próbek kalu dzieci z biegunką. Wśród badanych szczepów 58% stanowiły szczepy oporne na ciprofloksacynę. Przy użyciu metody PCR-RFLP określono częstość występowania mutacji w kodonie 86 genu gyrA kodującym podjednostkę A gyrazy DNA u C. jejuni. U wszystkich szczepów opornych na ciprofloksacynę (MIC dla ciprofloksacyny > 32 µg/ml) wykryto mutację w kodonie 86 genu gyrA, natomiast szczepy wrażliwe na ciprofloksacynę nie posiadały tej mutacji.

The aim of this study was to investigate the mutations in gyrA gene at Thr-86 position in fluoroquinolone resistant C. jejuni clinical isolates (2003-2005). The change of Thr to lie at 86 position is associated with high-level resistance to fluoroquinolone in C. jejuni. Thirty five (58%) of 65 C. jejími strains were found to be resistant to ciprofloxacin using E-test method. PCR-RFLP technique with the Rsal enzyme was used for the identification of mutation in gyrA gene. The primers spanning a part of the fluoroquinolone resistance determining region (QRDR) were designed based on the article of Alon- so et al. and the gyrA sequence of C. jejuni (Gen Bank accession number L04566). One of this primer had mismatch introduced at the second nucleotide from 3 ' end of the primer what gives an artificial Rsal cleavage site. All of the ciprofloxacin-resistant isolates contained a single point mutation in the gyrA gene: the replacement of Thr 86 by lie. The results showed that PCR-RFLP is a rapid and simple method for the detection of the high-level fluoroquinolone resistance in C. jejuni.