Rapid protein extraction method using ultrasound probe sonication for metal bound protein molecular weight screening in vegetal tissues

A fast, reliable and simple protein disruption method for metals (Cu, Ni, Co and Zn) bound protein molecular weight characterization in vegetal tissues is described. The method is based on the application of ultrasound probe sonication (USP) and was compared with the traditional and most widely used, grinding disruption method. The resulting cell lysates were characterized by size exclusion chromatography coupled to UV and inductive coupled plasma mass spectrometry. The most efficient extraction conditions were found to be 20 s sonication time at a frequency of 20 kHz without need of using protease inhibitor. The proposed method was proved to be efficient and fast for the disruption of vegetal tissues and could be considered as an alternative to conventional sample treatment for metal bound protein molecular weight screening and metal speciation studies in vegetal tissues.

---

Opisano szybką, prostą i wiarygodną metodę degradacji białek zawierających metale Cu, Ni, Co i Zn, a pochodzących z tkanek roślinnych, które scharakteryzowano poprzez pomiar masy molekularnej. W tym celu wykorzystano ultradźwięki (technikę USP) i sposób ten porównano z tradycyjną metodą degradacji poprzez mechaniczne rozcieranie. Lizat komórkowy charakteryzowano za pomocą chromatografii wykluczającej z detekcją UV oraz ICP-MS. Największe wydajności ekstrakcji uzyskiwano przy sonif1kacji w czasie 20 s przy częstotliwości 20 kHz bez dodatku inhibitora proteazy.