Densitometric determination of impurities in pharmaceuticals. Part V. Determination of folic acid and 2,4-diaminopteridine-6-carboxylic acid in methotrexate

A chromatographic and densitometric method has been developed for the identification and quantitative determination of folic acid and 2,4-diaminopteridine-6-carboxylic acid occurring as impurities in methotrexate. Two mobile phases were used for the separation: glacial acetic acid-dimethylsulfoxide-propanol-2-ammonia 25% (2:8:25:5 v/v) and dimethylsulfoxide-propanol-2-ammonia 25% (7:30:8 v/v) and ready to use HPTLC plates as stationary phase. Detection was carried out directly on plates together with quantitative densitometric measurements in UV at X = 273 nm and fluorimetric at A, = 366 nm. The newly developed method appears to be useful for the direct determination of folic acid and 2,4-diaminopteridine-6-carboxylic acid. Statistical analysis has proved that this method is accurate and repeatable.

---

Opracowano chromatograficzno -densytometryczną metodę identyfikacji i oznaczania kwasu foliowego i kwasu 2,4-diaminopterydyno-6-karboksylowego występujących jako zanieczyszczenia w preparacie methotreksat. Do rozdziału stosowano dwie fazy ruchome: kwas octowy lodowaty-dimetylosulfotlenek-propanol-2-amoniak 25% (2:8:25:5 v/v) i dimetylosulfotlenek-propanol-2-amoniak 25% (7:30:8 v/v) oraz gotowe płytki HPTLC jako fazę stacjonarną. Detekcję prowadzono bezpośrednio na płytkach, dokonując jednocześnie ilościowych pomiarów densytometrycznych w UV przy X = 273 nm i fluorymetrycznych przy X, = 366 nm. Stwierdzono, że opracowana metoda jest przydatna do oznaczeń bezpośrednich kwasu foliowego i kwasu 2,4-diaminoptery-dyno-6-karboksylowego, jest dokładna i powtarzalna o czym świadczy statystyczna ocena wyników.