Eksp. IV: Human Inflammation Antibody Array w linii HBEwt i HBE∆α po traktowaniu pyłem księżycowym

Eksperyment przeprowadzono na lizatach całokomórkowych, linii HBEwt i HBE∆α pozbawiona podjednostki α kanału BK_Ca. Komórki były wysiewane na płytki 6-dołkowe, w ilości 100 000 kom. na dołeki i po 3 dniach od wysiania traktowane 100µg/ml imitatora pyłu księżycowego (LD). Po 24h inkubacji z pyłem komórki były zdrapywane, i zamrażane. Lizaty wykonano z użyciem 2x Cell Lysis Buffer ( Abcam) dostarczonym w zestawie odczynników Human Inflammation Antibody Array (ab169804). Eksperyment przeprowadzono zgodnie z zaleceniami producenta. Lizaty były inkubowane z membranami przez noc 4°C. Płukane według zaleceń, następnie inkubowane z Miksem biotynylowanych przeciwciał również przez noc w 4°C, a streptawidyna-HRP była inkubowana przez 2h RT. Reakcje chemiluminescencyjną dokumentowano po 1-2min. Dokonano pomiaru intensywności sygnału w celu porównania poziomu danej cytokiny w poszczególnych lizatach z użyciem programu ImageJ.

Nazwy kolumn oznaczają:

Area - Powierzchnia zaznaczonego obszaru (liczba pikseli). Oznacza, ile pikseli obejmuje dana kropka (punkt reakcji na blotcie).

Mean - Średnia intensywność pikseli (ang. Mean Pixel Intensity) – uśredniona jasność pikseli w zaznaczonym obszarze. Im wyższa, tym silniejszy sygnał.

IntDen - Integrated Density – zintegrowana gęstość: Area × Mean. To całkowita „ilość światła” z danego punktu.

RawIntDen - Raw Integrated Density – surowa suma pikseli (często równa IntDen, ale może nie uwzględniać korekt jak tło).

Background - Średnia intensywność tła – zwykle pobierana z pustych obszarów. Używana do odjęcia szumu tła od sygnału.

Net Signal - Sygnał netto – skorygowany o tło.