Ocena poziomów formy zredukowanej i utlenionej glutationu oraz α-tokoferolu w mózgu szczura jako markerów zaburzeń równowagi pro-/antyoksydacyjnej

Stres oksydacyjny jest uważany za jeden z głównych czynników odpowiedzialnych za uszkodzenie komórek. Dąży się do określenia dokładnego związku między występowaniem stresu oksydacyjnego a zachodzącymi procesami patologicznymi, w tym celu poszukuje się metod oznaczania markerów wystąpienia zaburzenia równowagi oksydoredukcyjnej. Niniejsza praca wykonana w Katedrze Toksykologii Wydziału Farmaceutycznego Collegium Medicum Uniwersytetu Jagiellońskiego skupia się na oznaczeniach poziomów dwóch znanych antyoksydantów komórkowych: glutationu oraz α tokoferolu, jako markerów stresu oksydacyjnego wywołanego przez toczący się stan zapalny spowodowany podaniem lipopolisacharydu bakteryjnego LPS.Badania przeprowadzono na izolowanych prążkowiach szczurów, które otrzymywały intrastriatalnie różne dawki zawiesiny LPS w sztucznym płynie mózgowo rdzeniowym.Ze względu na duże zróżnicowanie metodyk i niejednoznaczną skuteczność więcej miejsca poświęcono na optymalizację metody oznaczania poziomów GSH i GSSG. Oznaczenia prowadzono metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z detekcja fluorescencyjną. Badano poziom glutationu w formie zredukowanej (GSH) i utlenionej (GSSG) oraz α-tokoferolu.Uzyskane wyniki wykazały związek pomiędzy podaniem LPS a zmianami w poziomach GSH i GSSG. Nie zauważono zmian w poziomach α-tokoferolu. Zawartości GSH wynosiły średnio między 30 a 50 mM na mg białka, GSSG między 1,5 a 3,5 mM na mg białka. Stosunek GSSG do GSH wynosił średnio 7,55% dla grupy kontrolnej i spadał poniżej 5% w grupach które otrzymywały LPS.Przeprowadzone badania pozwoliły na określenie metody i warunków prowadzenia oznaczenia poziomów GSH i GSSG w dalszych pracach.

Oxidative stress is considered to be one of the main factors responsible for the cell damage. Ways to determine the exact relationship between the presence of oxidative stress and pathological processes are now widely tested. For this purpose, methods of determining the levels of redox imbalance markers are explored. This work performed at the Department of Toxicology, Faculty of Pharmacy, Jagiellonian University Medical College focuses on the levels of two known cellular antioxidants: glutathione and α-tocopherol as markers of oxidative stress caused by ongoing inflammation induced by bacterial lipopolysaccharide (LPS) administration.Research was performed on isolated striatia of rats that received different doses of LPS suspended in artificial cerebrospinal fluid CSF. Due to the large diversity of methods and uncertain efficacy more effort was devoted to optimize the method for determining the levels of GSH and GSSG. Assay was performed by high performance liquid chromatography with fluorescence detection. Glutathione was determined in a reduced form (GSH) and oxidized (GSSG) and α-tocopherol separately. The results showed the relationship between administration of LPS and changes in the levels of GSH and GSSG. Changes in the levels of α-tocopherol were not observed.GSH content averaged between 30 and 50 mM per mg of protein, GSSG between 1.5 and 3.5 mM per mg of protein. GSSG to GSH ratio averaged 7.55% for the control group and fell below 5% in the groups that received LPS administration.This work defined the methods and conditions for determination the levels of GSH and GSSG in further works.