Analiza homozygotyczności szczepów rekombinacyjnych (RI CBxE) u myszy w oparciu o oznaczanie markerów mikrosatelitarnych chromosomów 18 i 19.

The purpose of the presented work was to investigate the homozygosity of the five newly derived recombinant inbred strains (RI 62, RI 64, RI 66, RI 71 and RI 74) bred in the Department of Genetics and Evolution, Institute of Zoology, Jagiellonian University. These RI strains were derived from CBA/Kw and KE inbred strains. The analysis of homozygosity was made on males and females from these strains, taken from F20-23 inbred generation. It was based on five microsatellite markers located on chromosomes 18 and six such markers on chromosome 19. Moreover, we analyzed activity of NADH-dependent dehydrogenase in the midpieces of mouse sperm from males of the same recombinant inbred strains. The cytochemical test and ImageJ image analysis software were used to evaluate oxidoreductive capability of the sperm mitochondria. Three parameters were obtained: the average intensity of grey level per pixel in the midpiece (MOD), a total optical density of gray per pixel in the midpiece (IOD) and the area of midpieces. In the first part of the experiment obtained results allowed us find a hundred percent homozygosity only in case of strain RI 66 (for both chromosomes), 19 chromosome homozygosity for the strain RI 71, and the absence of the genome stability in other RI strains. The results of cytochemical test showed that both midpiece area and the activity of diaphorase/NADH in the mouse sperm midpieces revealed statistically significant differences (p <0,05) between CBA/Kw and KE parental strains. The measures of diaphorase/NADH activity showed that it is higher in case of sperm mitochondria from CBA/Kw males. This parameter values in 64 RI strain were higher and in RI 74 strain were lower than those for both parental strains. The other RI strains possessed intermediate values of MOD and IOD when compared with CBA/Kw and KE strains.

Celem wykonanej pracy było zbadanie homozygotyczność pięciu nowo wyprowadzonych szczepów wsobnych rekombinacyjnych hodowli własnej Zakładu Genetyki i Ewolucjonizmu, Instytutu Zoologii Uniwersytetu Jagiellońskiego, pochodzących od szczepów wyjściowych CBA/Kw i KE, tj. RI 62, RI 64, RI 66, RI 71oraz RI 74. Analizy homozygotyczności dokonano na samcach i samicach pokolenia wsobnego F20-23, pochodzących z tych szczepów w oparciu o pięć markerów mikrosatelitarnych zlokalizowanych na chromosomie 18 oraz sześć takich markerów na chromosomie 19. Ponadto podjęto się również analizy aktywność dehydrogenaz zależnych od NADH (diaforazy/NADH) we wstawkach mysich plemników pochodzących od samców z tych samych szczepów wsobnych rekombinacyjnych. W tym celu posłużono się testem cytochemicznym obrazującym to zjawisko oraz programem do analizy obrazu ImageJ. Użyte oprogramowanie pozwoliło na opracowanie trzech parametrów: średniej szarości przypadającej na piksele we wstawce (MOD), łącznej szarości przypadającej na piksele we wstawce (IOD) oraz pola powierzchni wstawek. W przypadku pierwszej części doświadczenia uzyskane wyniki pozwoliły na stwierdzenie występowania stuprocentowej homozygotyczności tylko w przypadku szczepu RI 66 (dla obu chromosomów), także dla szczepu RI 71 (dla chromosomu 19) oraz braku stabilności genomu w pozostałych szczepach RI. Dane odnoszące się do wyników testu cytochemicznego obrazującego aktywność diaforazy/NADH we wstawkach mysich plemników, ujawniają istotne statystycznie różnice (p<0,05) pomiędzy szczepami wyjściowymi CBA/Kw i KE w każdym z analizowanych parametrów. Mitochondria plemników samców ze szczepu CBA/Kw wykazują większą średnią objętość niż dla KE. Pomiary aktywności diaforazy/NADH pokazują, że jest ona wyższa w przypadku mitochondriów plemników pochodzących ze szczepu CBA/Kw. Aktywność diaforazy/NADH w mitochondriach plemników w szczepie RI 64 była wyższa, a w RI 74 niższa niż wartości tego parametru dla obydwu szczepów wyjściowych. Pozostałe szczepy RI posiadają pośrednie wartości parametrów MOD i IOD w stosunku do obydwóch szczepów wyjściowych.