Efekty działania pochodnych katechiny i cyklofosfamidu na komórki leukemiczne

Galusan (-)-epigalokatechiny (EGCG) jest pochodną katechiny najliczniej występującą w zielonej herbacie. Mafosfamid (MAF) jest pochodną cyklofosfamidu i należy do grupy związków alkilujących nowej generacji. Celem pracy było określenie działania EGCG i MAF na patologiczne komórki hematopoetyczne. Badania wykonano na komórkach ludzkiej promielocytarnej linii komórkowej HL-60. Komórki HL-60 eksponowano na działanie EGCG w dawkach 5 μg, 10 μg, 25 μg, 50 μg, 75 μg, oraz 100 μg w przeliczeniu na ml medium hodowlanego, natomiast MAF w dawkach 1 μg, 2,5 μg, 5 μg, 10 μg, 15 μg, 20 μg, 25 μg i 50 μg w przeliczeniu na ml medium hodowlanego. Analizowano także efekty kombinowanego działania EGCG i MAF na komórki leukemiczne. Funkcjonalne i morfologiczne zmiany zachodzące w komórkach HL-60 określono przy użyciu metody spektrofotometrii i cytometrii przepływowej po 24 i 48 godzinach po ich potraktowaniu. Aktywność metaboliczną komórek określono stosując test MTT (bromku 3[4,5-dimetylo-2-ilo]-2,5-difenylotetrazolu) i test FDA/PI (dioctan fluoresceiny / jodek propidyny), a wielkość komórek i gęstość analizując wartości FSC (ang. forward scatter channel) i SSC (ang. side scatter channel). Pochodne katechiny i cyklofosfamidu spowodowały czasowe zmiany w aktywności metabolicznej komórek określonej ilością utworzonego formazanu przy zastosowaniu testu MTT oraz procentowymi ilościami komórek w populacjach FDA+/PI-, FDA-/PI-, FDA-/PI+ przy użyciu testu FDA/PI, jak również czasowe zmiany w wielkości i ziarnistości komórek określane procentową ilością komórek w populacjach FSC high/SSC low, FSC low/ SSC high, FSC high/SSC high. Przeciwleukemiczny potencjał EGCG i MAF był zależny od zastosowanego związku, jego dawki oraz od punktu czasowego, w którym przeprowadzano analizy. W przypadku kombinowanego działania EGCG i MAF na komórki HL-60 zaobserwowano nasilenie aktywności przeciwnowotworowej. Wyniki przeprowadzonych badań są pierwszymi danymi ukazującymi efekty kombinowanego działania mafosfamidu i galusanu (-)-epigalokatechiny na ludzkie komórki leukemiczne.

(-)-Epigallocatechin gallate (EGCG) is the major catechin found in green tea. Mafosfamide (MAF) is a cyclophosphamide derivative and belongs to the new generation alkylating agents. The aim of the study was to determine the alone and combined effects of EGCG and MAF on pathological hematopoitic cells.The investigations were conducted on human promyeolocytic HL-60 cells. The leukemic cells were exposed to the action of EGCG at doses 5 μg, 10 μg, 25 μg, 50 μg, 75 μg, 100 μg per 1 ml of medium and MAF at doses 1 μg, 2,5 μg, 5 μg, 10 μg, 15 μg, 20 μg, 25 μg, 50 μg per 1 ml of medium. The effects of EGCG and MAF on HL-60 cells were analyzed at 24 and 48 h after their exposure. The research was conducted using spectrophotometric and flow cytometric methods. The MTT assay, FDA/PI method and FSC?SSC measurement were used. After exposure of HL-60 cells to the EGCG and MAF the functional and morphological changes were observed. The various patterns of temporary alteration in the cell viability, cell membrane damage, the cell size and granularity were found. These are the first data that show the combined action of EGCG and MAF on human leukemic cells.