Spektrofotometryczne oznaczanie ilościowe polimyksyny B w postaci pochodnej dabsylowej

Opracowano nową, szybką metodę oznaczania polimyksyny B wykorzystującą reakcję wolnych grup aminowych z chlorkiem dabsylu, z którym tworzy barwne połączenia. Widmo otrzymanego połączenia wykazuje analityczną długość fali 491 nm. Ustalono, że molowy stosunek DBS do polimyksyny B w reakcji kondensacji wynosi 5 : 1, co jest zgodne ze stechiometrią reakcji zakładaną na podstawie budowy cząsteczki badanego antybiotyku. Jako optymalne warunki reakcji ustalono 30-minutowe ogrzewanie w temperaturze 60oC. Produkt jest stabilny w temperaturze pokojowej w czasie do 3 godzin. Uzyskany produkt charakteryzuje się wysokim współczynnikiem absorpcji molowej ε= 2,21•10-4, potwierdzającym czułość metody. Zależność absorbancji od stężenia jest prostoliniowa (r= 0,99902). Opracowaną metodę cechuje wysoka czułość LOD= 1,93•10-6 mol/dm3 i LOQ= 5,85•10-6 mol/dm3, dobra precyzja RSD od 0,18% do 2,74% dla poszczególnych poziomów stężeń i wysoka dokładność wyrażona jako procent odzysku od 98,13 % do 105,00 %. Uzyskane wyniki świadczą o możliwości zastosowania opracowanej metody do oznaczania ilościowego polimyksyny B w surowcu farmaceutycznym i lekach na etapie produkcji i kontroli jakości.

A fast spectrophotometric method has been developed for polymyxin B identification and determination after condensation reaction of free amino groups with dabsyl chloride which creates colored connections. The spectrum of the result connection shows test wavelength 491 nm. It was a molar ratio of DBS to the polymyxin B in reaction of condensation, which is 5: 1. As the optimal conditions for the reaction was found 30-minute heating at a temperature of 60oC. The product is stable at room temperature in the time up to 3 hours. The product shows a high molar absorption coefficient ε = 2,21•10-4, confirming the sensitivity of the method. The developed method has a good linearity with very broad spectrum, correlation coefficient of r = 0.9992. Developed method has high sensitivity LOD = 1,93 • 10-6 mol/dm3 and LOQ = 5,85 • 10-6 mol/dm3, good precision RSD from od 0,18 % do 2,74 % for individual levels of concentrations and high accuracy expressed as a percentage of recovery from 98,13 % do 105,00 %. The results obtained provide the possibility of application of the developed method for quantification of polymyxin B raw pharmaceutical and medicines at the stage of production and quality control.