Influence of ABT-737 and resveratrol on the induction of programmed death in acute lymphoblastic leukemia cells

ABT-737 is non-peptide, synthetic compound, belonging to BH3 mimetics. Resveratrol (Res) is a natural compound, a derivative of stilbenes. Res appears mainly in grapes, red wine and soybean. Many studies have shown anticancer activity of ABT-737 and Res, but there is no reports relating to the combination of these agents. The aim of the study was to determine the influence of ABT-737 and Res given alone or in combination on the induction of programmed death in leukemia cells.The investigations were conducted on human acute lymphoblastic leukemia Molt-4 cells. The leukemia cells were exposed to the action of ABT-737 in concentration of 0.25 and 0.5 µM and Res in concentration of 30 µM. Changes observed in Molt-4 cells were analyzed using flow cytometric and microscopic methods at 24 and 48 hour after agent application. The alternations in the structure and integrity of cell membrane were analyzed using annexin V/ propidium iodide assay. Changes in mitochondrial membrane potential was assessed using tethramethylorodamine ethyl ester staining. Morphological changes of Molt-4 cells were observed under light microscope.The present study demonstrated, that ABT-737 and Res induced apoptosis and necrosis in Mot-4 cells. The effects of ABT-737 and Res were dependent on time intervals after agent application. The combination of ABT-737 and Res enhanced the induction of programmed cell death, in comparison with single agent treatment. The obtained results are the first data related to combined action of ABT-737 and Res on the induction of programmed death in leukemia cells. An understanding of the precise mechanisms of triggering of programmed cell death by ABT-737 in combination with Res is essential for the development of novel anticancer therapeutic strategies.

ABT-737 to niepeptydowy, syntetyczny związek chemiczny, należący do mimetyków domeny BH3. Resweratrol (Res) jest związkiem pochodzenia naturalnego, zaliczanym do stilbenów i występującym głównie w winogronach, czerwonym winie oraz soi. W wielu badaniach wykazano aktywność przeciwnowotworową ABT-737 oraz Res, jednakże nie ma doniesień dotyczących skojarzonego działania tych związków na komórki nowotworowe. Celem pracy było określenie wpływu ABT-737 i Res zastosowanych pojedynczo lub w skojarzeniu na indukowanie programowanej śmieci w komórkach białaczkowych.Badania przeprowadzono na ludzkich komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej Molt-4. Komórki białaczkowe eksponowano na działanie ABT-737 w stężeniach 0.25 i 0.5 µM, Res w stężeniu 30 µM oraz kombinacji tych związków. Analizy wykonano na poziomie komórkowym przy zastosowaniu metod cytometryczych i mikroskopowych po upływie 24 i 48 godzin od podania związków. Zmiany w strukturze oraz integralności błony komórkowej określono za pomocą testu z aneksyną V i jodkiem propidyny. Analizę zmian w potencjale mitochondrialnym przeprowadzono stosując metodę barwienia komórek tetrametylorodaminą. Oceny zmian morfologicznych komórek Molt-4, wybarwionych przy użyciu zestawu Hemacolor, dokonano w mikroskopie świetlnym.W doświadczeniach wykazano, że ABT-737 i Res indukują apoptozę oraz nekrozę w komórkach Molt-4, a efekt działania związków był zależny od czasu ekspozycji. Skojarzone działanie ABT-737 i Res zwiększyło efektywność indukowania programowanej śmierci w komórkach białaczkowych, w porównaniu z zastosowaniem tych związków pojedynczo. Wyniki przedstawione w pracy są pierwszymi danymi dotyczącymi wpływu kombinowanego działania ABT-737 i Res na indukowanie programowanej śmierci w komórkach białaczkowych. Poznanie dokładnego mechanizmu indukującego programowaną śmierć komórki przez ABT-737 w kombinacji z Res jest istotne dla rozwoju nowych przeciwnowotworowych strategii terapeutycznych.