Characteristics of xenobiotic transporter BCRP.

Celem pracy było zapoznanie się z metodami ekspresji, rozdzielania i detekcji transportera ksenobiotyków breast cancer resistance protein (BCRP) i na tej podstawie sporządzenie charakterystyki tego białka błonowego. Prace laboratoryjne prowadzono z wykorzystaniem szczepu genetycznie zmodyfikowanych drożdży LPY11 szczepu Saccharomyces cerevisiae transfekowanych ludzkim genem abcg2. Przeprowadzono hodowlę drożdży na pożywkach stałych oraz w pożywkach płynnych. Uzyskany materiał poddano wirowaniu różnicowemu, ultrawirowaniu, solubilizacji i ponownemu ultrawirowaniu. Kolejnym etapem działań było elektroforetyczne rozdzielenie otrzymanych białek oraz wykorzystanie metody Western blotting w celu rozdziału i identyfikacji białka. Metoda ta polega na unieruchomieniu rozdzielonych białek na membranie i zidentyfikowaniu konkretnego rodzaju białek dzięki użyciu swoistych przeciwciał. Wyniki odczytano za pomocą metody chemiluminescencyjnej. Na podstawie otrzymanych wyników potwierdzono obecność transportera BCRP i dokonano jego charakterystyki.

The aim of the work was to get acquainted with the methods of expression, separation and detection transporter of xenobiotics breast cancer resistance protein (BCRP), and on this basis to draw up the characteristics of this membrane protein. Laboratory work carried out with the use of genetically modified strain of the yeast Saccharomyces cerevisiae LPY11 transfected with human ABCG2 gene. Culture of yeast was carried out on solid media and liquid media. The resulting material was subjected to differential centrifugation, ultracentrifugation, re-solubilisation and ultracentrifugation. The next stage involves the electrophoretic separation was of the proteins and the use of Western blotting for protein separation and identification. This method involves immobilizing the separated proteins in the membrane and to identify the specific type of proteins through the use of specific antibodies. Western blot analysis consisted of: electrotransfer of proteins on a nitrocellulose, wherein subsequently the detection of specific antibodies (primary and secondary) using the chemiluminescnt method. Based on these results confirmed the presence of BCRP transporter and made its characteristics.