Regulacja ekspresji genu ADAM17

ADAM17 is an enzyme, which shed ectodomains of more than 80 proteins including one of the most important proinflammatory cytokines, tumor necrosis factor (TNF). Transcription of ADAM17 is stimulated by cytokines, bacterialproducts (e.g. LPS), phorbol esters (eg. PMA), and other factors, but it is not known, which signaling pathways are involved in this process. The goal of my work was to analyze whether ERK1/2 kinases are involved in IL-1β- or PMA-mediated stimulation of ADAM17 expression in murine brain endothelial cells (MBE). Using Western blotting I confirmed that the concentration of U0126 inhibitor used in my experiments was sufficient to inhibit the basal as well as IL-1β-, PMA- and LPS-stimulated phosphorylation of ERK1/2 kinases. I also used quantitative PCR to compare the level of mRNA encoding ADAM17 in MBE cells unstimulated or stimulated by IL-1β or PMA, in the absence or presence of U0126. The results of my work do not support the hypothesis that the ERK1/2 kinases are involved in the stimulation of ADAM17 transcription. The results are not unequivocal, because in my experiments I observed very low stimulation of ADAM17 expression.

Białko ADAM17 jest enzymem uwalniającym z powierzchni komórek ektodomeny ponad 80 białek, w tym jedną z najważniejszych cytokin prozapalnych – czynnik martwicy nowotworów (TNF). Wiadomo, że transkrypcja ADAM17 ulega stymulacji pod wpływem cytokin, produktów bakteryjnych (np. LPS), estrów forbolu (np. PMA) oraz innych czynników, ale nie wiadomo, jakie ścieżki przekazu sygnału są w ten proces zaangażowane. Celem mojej pracy była analiza udziału kinaz ERK1/2 w stymulacji ekspresji ADAM17 przez IL-1β i PMA w komórkach mysiego środbłonka (MBE). Przy pomocy techniki Western blotting zbadałam, czy użyte w moim doświadczeniu stężenie inhibitora U0126 jest odpowiednie do zahamowania fosforylacji kinaz ERK1/2 pod wpływem IL-1β, PMA oraz LPS. Przy pomocy ilościowego PCR porównałam poziom mRNA kodującego białko ADAM17 w komórkach MBE niestymulowanych i stymulowanych przez IL-1β oraz PMA, pod nieobecność lub w obecności inhibitora U0126. Wyniki mojej pracy nie potwierdzają hipotezy, że kinazy Erk1/2 są zaangażowane stymulację transkrypcji białka ADAM17. Wyniki nie są jednak jednoznaczne, gdyż w moich eksperymentach uzyskałam bardzo niewielką stymulację ekspresji ADAM17.