Wpływ wyciszenia MCPIP1 na biologię linii komórkowej raka jasnokomórkowego nerki CAKI-1

MCPIP1 to wielofunkcyjne białko regulatorowe zaangażowane w różne procesy biologiczne, takie jak zapalenie, różnicowanie i apoptoza. Celem niniejszej pracy było zbadanie wpływu wyciszenia MCPIP1 za pomocą shRNA na biologię linii komórkowej raka jasnokomórkowego nerki CAKI-1. Przeprowadzone badania wykazały wzrost ekspresji MCPIP1 w linii CAKI-1 z wyciszonym MCPIP1 po odbankowaniu wcześniej zbankowanych komórek. W toku przeprowadzonych badań zaobserwowano wzrost proliferacji komórek z wyciszonym MCPIP1 w stosunku do kontroli i do linii dzikiej. Zaobserwowano także wzrost ekspresji CD1 na poziomie mRNA i białka w wyciszonych liniach. Poziom mRNA MMP-2 i c-Myc różnił się miedzy wyciszonymi liniami, w linii shMCPIP1#1 wzrósł w stosunku do kontroli, w linii shMCPIP1#3 był na tym samym poziomie co w linii kontrolnej. Wzrost ekspresji c-Myc na poziomie białka zaobserwowano dla linii shMCPIP1#1, natomiast w linii shMCPIP1#3 zaobserwowano spadek poziomu białka. W linii shMCPIP1#3 poziom fosforylowanego i całkowitego białka mTOR był wyższy w linii z wyciszonym MCPIP1 niż w kontroli. Poziom fosforylowanego m-TOR był niższy niż całkowitego m-TOR w pierwszym doświadczeniu, natomiast powtórny western blot wykazał odwrotną zależność. Stosunek p-mTOR do mTOR tot był wyższy dla linii kontrolnej niż shMCPIP1#3. Po powtórzeniu analizy western blot otrzymano odwrotny wynik. Poziom ekspresji mRNA CXCR4 był istotnie wyższy w liniach komórkowych z wyciszeniem niż w kontrolach. W przypadku MMP-2 i VEGF, istotny statystycznie wzrost poziomu mRNA zaobserwowano tylko w przypadku linii shMCPIP1#3.

The aim of this study was to examine the influence of shRNA silencing on the biology of clear cell renal cell carcinoma cell line CAKI-1. We observed increase cell proliferation in cell line with MCPIP1 silencing in compared to wild and control cell line. We observed also increase expression CD1 mRNA and protein in cell line with silenced MCPIP1. c-Myc mRNA level differ between silenced cell lines, in shMCPIP1#1 increased as compared to the control, in cell line shMCPIP1#3 mRNA levels were on the same level as in control cell line. Increase expression of c-myc protein level was observed for the cell line shMCPIP1#1, while the cell line shMCPIP1#3 showed a decrease c-Myc expression. In the study we observed increased protein level of total and phosphorylated mTOR in cell line with silenced MCPIP1 compared to the control cell line. In cell line with silenced MCPIP1 the level of phosphorylated m-TOR was lower than total mTOR in first western blot analysis, but in second western blot analysis inverse relationship was observed. p-mTOR / mTOR ratio was higher in the control cell line compared to shMCPIP1#3 cell line. Repetition western blot analysis gave the opposite result. We observed increase expression CXCR4 mRNA in cell line with silenced MCPIP1. For MMP-2 and VEGF statistically significant increases in mRNA levels only for shMCPIP1#3 cell line were observed.