Identyfikacja białek obecnych w ektosomach uwalnianych przez komórki ludzkiego czerniaka linii WM1205Lu

Malignant melanoma is one of the most aggressive human tumours. Frequency of occurrence for this type of tumor increase year by year, and mortality even reach 90%. Melanoma is most often detected in the metastatic phase when systemic anty-tumor therapy does not give expected effects. New treatments for this type of tumor are still being sought. Ectosomes are small spherical vesicles classified as extracellular microvesicles, generated by budding from the plasma membrane, in both normal and tumor cells. Extracellular microvesicles released by tumor cells (TMV) are involved in the communication of this cells by transporting bioactive molecules, genetic material, and proteins. Numerous studies confirm the contribution of TMV in all stages of tumor development, including melanoma. The research is focus on development effective methods for the identification of tumors and anti-tumor treatment using ectosomes, which could be an effective therapeutic against malignant melanoma. The aim of this work was to identify proteins inside ectosomes released by malignant melanoma cells line with lung metastasis -WM1205U. For this purpose, cell cultures were grown to obtain monolayers. Ectosomes were obtained from the culture medium by differentiation centrifugation. Proteins were separated by SDS-PAGE electrophoresis. Mass spectrometry was then performed to identify the proteins and to analyze them in the FunRich program. As a result of extensive research, 355 proteins with differentiated functions have been identified. Many of them may influence tumor progression and development.

Czerniak złośliwy skóry to jeden z najgroźniejszych nowotworów człowieka. Zachorowalność na ten typ nowotworu zwiększa się z roku na rok, a śmiertelność wynosi nawet 90%. Czerniak najczęściej wykrywany jest już w fazie przerzutów, kiedy standardowo stosowana terapia antynowotworowa, nie daje oczekiwanych efektów. Wciąż szukane są nowe metody leczenia tego typu nowotworu. Ektosomy to małe kuliste struktury zaliczane do mikropęcherzyków błonowych, uwalniane w procesie pączkowania błony komórkowej, zarówno przez komórki prawidłowe jak i nowotworowe. Mikropęcherzyki błonowe uwalniane przez komórki nowotworowe (TMV) uczestniczą w komunikacji komórek nowotworowych, transportując bioaktywne cząsteczki, materiał genetyczny oraz białka. Liczne badania potwierdzają udział TMV we wszystkich etapach rozwoju nowotworów, w tym czerniaka. W trakcie badań jest opracowanie skutecznych metod identyfikacji nowotworów oraz ich leczenia z wykorzystaniem ektosomów. Opracowanie terapii antynowotworowej z wykorzystaniem ektosomów, mogłoby stanowić skuteczną metodę leczenia czerniaka złośliwego skóry. Celem tej pracy była identyfikacja białek ektosomów uwalnianych przez komórki czerniaka złośliwego z przerzutem do płuc linii WM1205Lu. W tym celu prowadzono hodowle komórkowe do uzyskania monowarstwy. Ektosomy uzyskano z pożywki hodowlanej metodą wirowania różnicującego. Białka rozdzielono elektroforetycznie metodą SDS-PAGE. Następnie przy zastosowaniu spektrometri mas dokonano identyfikacji białek oraz ich analizę w programie FunRich. W wyniku przeprowadzonych badań zidentyfikowano 355 białek o zróżnicowanych funkcjach, które mogą wpływać na progresje nowotworu.