The effect of 3xFLAG tag on ribonuclease activity of MCPIP1

MCPIP1 is involved in the immune response because it is a negative regulator of inflammation. In its structure it contains the RNA-binding zinc finger CCCH-type domain and the PIN domain that is responsible for the ribonuclease activity of the protein. MCPIP1 degrades transcripts of many proinflammatory molecules, such as IL-1β, IL-6, or IL-12b, and miRNAs precursor molecules. Due to the important role of MCPIP1 protein in cellular processes, it is extensively investigated, using protein tags, including FLAG tag. The 3xFLAG tag sequence attached to the 5 'end of the MCPIP1 gene allows for easier detection of the protein with tag-specific antibodies.The aim of the experiment was to investigate whether the 3xFLAG tag had an effect on ribonuclease activity of the protein. For this purpose, a vector coding the MCPIP1 protein with a 3xFLAG tag attached at the 5` end was prepared and compared of its RNase activity with endogenous MCPIP1 using the luciferase reporter gene system.Based on the data obtained, there was no negative effect of the 3xFLAG tag on the ribonuclease activity of MCPIP1 protein.

Białko MCPIP1 jest zaangażowane w odpowiedź immunologiczną, bowiem jest negatywnym regulatorem stanu zapalnego. W swojej strukturze zawiera domenę palca cynkowego typu CCCH oddziałującą z RNA oraz domenę PIN, która odpowiada za aktywność RNazową białka. MCPIP1 degraduje transkrypty wielu cząsteczek prozapalnych, np. IL-1β, IL-6, czy IL-12b oraz cząsteczki prekursorowego miRNAs. Ze względu na istotną rolę białka MCPIP1 w procesach komórkowych jest ono intensywnie badane, do czego przydatne są znaczniki białkowe, m.in. metka FLAG. Sekwencja metki 3xFLAG dołączona do końca 5` genu kodującego MCPIP1 umożliwia łatwiejszą detekcję białka z wykorzystaniem przeciwciał specyficznych wobec metki.Celem przeprowadzonego doświadczenia było zbadanie, czy metka 3xFLAG ma wpływ na aktywność rybonukleazową białka. W tym celu przygotowano wektor kodujący białko MCPIP1 z dołączoną na końcu 5` metką 3xFLAG i porównano jego aktywność RNazową z endogennym MCPIP1, wykorzystując system genu reporterowego lucyferazy.Na podstawie otrzymanych danych nie stwierdzono negatywnego wpływu metki 3xFLAG na aktywność rybonukleazową białka MCPIP1.