Optimization of clathrin visualization in Vero cells using indirect immunofluorescence technique

Clathrin is a significant protein in the formation of coated vesicles by which materials are introduced into the cell’s interior from an extracellular environment during clathrin-mediated endocytosis.The aim of the experiment was to optimize visualization of clathrin in Vero cells using indirect immunofluorescence technique. In the experiment, immunoreaction and cell permeabilization steps were modified to better visualize the protein in microscopic images. The optimization of the clathrin staining protocol can be used to study clathrin-dependent transport, for example, to analyze the pathways of virus entry into host cells.

Klatryna jest ważnym białkiem w endocytozie biorącym udział w opłaszczaniu pęcherzyków, poprzez które następuje wprowadzenie materiału ze środowiska zewnętrznego do wnętrza komórki.Celem doświadczenia była optymalizacja wizualizacji klatryny w linii komórkowej Vero przy użyciu immunofluorescencji pośredniej. W przeprowadzonej pracy zmodyfikowano etapy nałożenia przeciwciał oraz permeabilizacji komórek, dzięki czemu lepiej uwidoczniono białko na obrazach mikroskopowych.Opracowanie optymalizacji protokołu barwienia klatryny może być wykorzystane do badania transportu klatryno-zależnego np. do analizy internalizacji wirusa do komórek gospodarza.