Porównanie krzywych wzrostowych dwóch szczepów bakterii Salmonella enterica Typhimurium: LT-2 i VNP20009 oraz optymalizacja warunków elektroporacji szczepu VNP0009

Currently attempts are made to use bacteria in experimental cancer therapies. They might be an effective alternative to chemo- and radiotherapy. One of the potential therapeutic strains is Salmonella enetrica Typhimurium VNP20009. The aim of the research project conducted in the Department of Cell Biochemistry is to use VNP as a vector which apart from killing cells in the tumour and activating the immune system, also codes for proteins with anti-cancer activities. The goal of my study was to determine the optimal conditions of VNP electroporation – as a method for bacteria transformation with suitable plasmids and to compare its growth rate with that of a wild strain. To achieve it, efficiencies of electroporation at various possible parameters of the process were evaluated. Also growth curves of both VNP and the wild strain were compared. As a result, optimal electroporation conditions were determined as 25μF, 100Ω, 2,4kV. VNP proved to reach a stationary phase of growth at a lower concentration of bacteria than the wild strain. The results shall be used in further work with the VNP strain.

Obecnie podejmuje się już próby wykorzystania bakterii w eksperymentalnych terapiach przeciwnowotworowych. Mogą one stanowić skuteczną alternatywę dla chemio- i radioterapii. Jednym z potencjalnych szczepów terapeutycznych jest szczep Salmonella enetrica Typhimurium VNP20009 (określany dalej jako VNP). Celem prowadzonego w Zakładzie Biochemii Komórki projektu jest wykorzystanie VNP jako wektora, który oprócz tego, że sam zabija komórki w obrębie guza i aktywuje układ odpornościowy, koduje także białka o potencjale przeciwnowotworowym. Celem mojej pracy było określenie optymalnych warunków elektroporacji szczepu VNP – jako metody transformacji bakterii odpowiednimi plazmidami oraz porównanie szybkości wzrostu VNP ze szczepem dzikim. W tym celu przetestowano różne możliwe kombinacje parametrów elektroporacji i sprawdzono ich wpływ na wydajność procesu oraz porównano krzywe wzrostowe VNP i szczepu dzikiego. W wyniku eksperymentów optymalne warunki elektroporacji określono jako 25μF, 100Ω, 2,4kV. Szczep VNP osiąga stacjonarną fazę wzrostu przy niższym stężeniu bakterii, niż szczep dziki. Wyniki zostaną wykorzystane w dalszych pracach ze szczepem VNP.