Wpływ RNazy MCPIP1 na poziom białka AGR2 w komórkach linii HepG2 oraz produkcja wektora lentiwirusowego z sekwencją kodującą białko AGR2

Monocyte Chemoattractant Protein-Induced Protein 1 (MCPIP1), also known as Regnase-1, belongs to CCCH-zinc finger containing protein family. MCPIP1 possesses PIN domain that is responsible for MCPIP1 RNase activity. MCPIP1 is a vital regulator of inflammation through degrading mRNA encoding proinflammatory cytokines (IL-6, IL-1β) and inhibiting NF-κB and AP-1 pathway. Among putative targets cleaved by MCPIP1 is mRNA encoding AGR2. AGR2 is disulfide isomerase that provides strict conformational protein folding in the endoplasmic reticulum, and it is involved in tumour progression. The aim of this study was to investigate the role of MCPIP1 on AGR2 protein level in HepG2 cells and production of a lentiviral vector with AGR2 coding sequence in Tet-on system. These results indicate that MCPIP1 negatively regulates AGR2 protein level in HepG2 cells, and the lentiviral vector provides a stable cell line with AGR2 overexpression.

Białko MCPIP1 (ang. Monocyte Chemoattractant Protein-Induced Protein 1), znane również jako Regnaza-1, należy do rodziny białek MCPIP z domeną palca cynkowego typu CCCH. Białko MCPIP1 posiada domenę PIN o aktywności endorybonukleazy i poprzez degradację transkryptów niektórych cytokin prozapalnych (m.in. IL-6, IL-1β) oraz hamowanie aktywacji czynników transkrypcyjnych takich jak NF-κB czy AP-1, odgrywa istotną rolę w regulacji stanu zapalnego. Nowe matryce degradowane przez MCPIP1 są nieustannie poznawane, a wśród potencjalnych kandytatów do degradacji znajduje się transkrypt dla izomerazy siarczkowej AGR2. AGR2 odpowiada w komórce za przyjmowanie przez dojrzewające białka odpowiedniej konformacji i wykazano, iż pełni ono istotne funkcje w progresji nowotworowej. Niniejsza praca miała na celu sprawdzenie, czy MCPIP1 wpływa na poziom izomerazy disiarczkowej AGR2 w komórkach linii HepG2 oraz produkcję wektora lentiwirusowego z sekwencją kodującą AGR2 w systemie Tet-on. Uzyskane wyniki wskazują, iż MCPIP1 negatywnie reguluje AGR2 na poziomie białka, a regulacja ta jest zależna od jego aktywności endorybonukleazy. Natomiast zaprojektowany w systemie Tet-on wektor lentiwirusowy umożliwia uzyskanie stabilnej linii komórkowej z kontrolowaną w czasie nadekspresją białka AGR2.