Produkcja przeciwciał monoklonalnych specyficznych względem białka iRFP670 z zastosowaniem technologii opartej o komórki hybrydoma

Białko iRFP670 należy do grupy białek iRFP (białka fluorescencyjne podczerwieni), które powstały na bazie białka RpBphP6 pochodzącego z Rhodopseudomonas palustris na skutek mutacji w rejonie domen PAS i GAF oraz delecji domen efektowej i PHY. Białka iRFP w tym iRFP670 to homodimery które zostały zaprojektowane tak, by specyficznie inkorporować endogenną biliwerdynę IXa z komórek ssaczych. W głównej mierze znajdują zastosowanie w obrazowania in vivo. Celem niniejszej pracy było otrzymanie przeciwciał monoklonalnych specyficznie rozpoznających białko iRFP670 z wykorzystaniem technologii opierającej się o komórki hybrydoma. W wyniku fuzji splenocytów pochodzących z immunizowanej myszy z komórkami szpiczaka uzyskano 10 pozytywnych klonów produkujących specyficzne przeciwciała względem białka iRFP670. Z powodu zakażenia lub utarty zdolności produkcji przeciwciał, utrzymano tylko 1 klon. Klon ten scharakteryzowano, aby finalnie przystąpić do oczyszczania produkowanych przez niego do pożywki przeciwciał specyficznych względem białka iRFP670 przy użyciu złoża POROS™ CaptureSelect™ IgM Affinity Matrix. Uzyskane przeciwciała, dzięki zdolności rozpoznawania liniowego epitopu mogą znaleźć zastosowanie m. in. w rozpoznawaniu zdenaturowanej formy białka.

The iRFP670 protein belongs to the group of iRFP proteins (infrared fluorescent proteins), which were based on the RpBphP6 protein from Rhodopseudomonas palustris due to mutations in the PAS and GAF domains and deletion of effect and PHY domains. The iRFP proteins including iRFP670 are homodimers that have been designed to specifically incorporate endogenous biliveridine IXa from mammalian cells. They are mainly used in in vivo imaging. The aim of this work was to obtain monoclonal antibodies specifically recognizing the iRFP670 protein using technology based on hybridoma cells. As a result of fusion of splenocytes from immunized mice with myeloma cells, 10 positive clones producing specific antibodies against the protein iRFP670 were obtained. Due to infection or abrogation of antibody production capacity, only one clone was maintained. Maintained clone has been characterized to finally purify its iRFP670-specific antibodies produced by it to the medium using the POROS ™ CaptureSelect ™ IgM Affinity Matrix. Obtained antibodies, thanks to the ability to recognize the linear epitope, can be used in recognizing the denatured form of protein.