Weryfikacja systemu opartego na transpozonie Sleeping Beauty służącego do indukowanej ekspresji genu

Currently used protein expression systems do not present the ideal characteristics desired by researchers. The main two are eukaryotic and prokaryotic systems. Each of them exhibits many positive features, although they are not without flaws. The eukaryotic system based on the Sleeping Beauty transposon can solve the problems that scientists face. Stable, long-lasting expression, and in particular the possibility of inducible production of potentially lethal proteins for cells, are the unquestionable advantages of this system. The aim of this study was to examine the applicability of an inducible system based on the Sleeping Beauty transposon in the human astrocytoma cell line U251-MG. The obtained results confirmed the ability to quickly obtain a cell line characterized by doxycycline-induced expression of the introduced transgene. The applied system allows to obtain a high level of induction and long-term expression. The conducted research indicates the possibility of using the inducible Sleeping Beauty system in the U251-MG cell line to study proteins whose constitutive expression is toxic to the cell.

Używane obecnie systemy ekspresji białek nie prezentują idealnych cech pożądanych przez badaczy. Dwa podstawowe to sysytem eukariotyczny i prokariotyczny. Każdy z nich przejawia wiele cech pozytywnych, jednakże nie są one pozbawione wad. System ekspresji eukariotycznej oparty o transpozony, nazwany Sleeping Beauty, może nieść rozwiązanie problemów z którymi mierzą się naukowcy. Stabilna, długotrwała ekspresja, a w szczególności możliwość indukowalnej produkcji białek potencjalnie zabójczych dla komórek, to niewątpliwe zalety tego systemu. Wykonana praca miała na celu zbadanie możliwości zastosowania indukowalnego systemu opartego o transpozon Sleeping Beauty w ludzkiej lini komórek gwiaździaka U251-MG. Uzyskane wyniki potwierdziły możliwość szybkiego otrzymania linii komórkowej charakteryzującej się indukowaną doksycykliną ekspresją wprowadzonego transgenu. Zastoswany system pozwala na uzyskanie wysokiego poziomu indukcji oraz długotrwałej ekspresji. Przeprowadzone badania wskazują na możliwość zastosowania indukowalnego systemu Sleeping Beauty w komórkach linii U251-MG do badania białek których konstytutywna ekspresja jest toksyczna dla komórki.