Investigation of the influence of low temperature storage of extracellular vesicles on their stability and phenotypic traits

Extracellular Vesicles (EVs) are small membrane-encolsed structures secreted by cells by exocytosis or membrane blebbing. The study of the impact of low-temperature EVs storage was based on quantitative analysis using Nanoparticle Tracking Analysis (NTA) and phenotypic analysis based on RNA content analysis and expression of surface markers such as CD81 and CD90 using a high-resolution flow cytometry. For comparison purposes, three population of EVs were used, which were isolated from cell culture serum in the ultracentrifugation process. The results of the analyzes showed significant changes caused by the low temperature storage of the EVs, especially the decrease in the expression of the CD90 marker and the increase in the size diversity of EVs. It is also significant that these changes were not analogous in all EVs populations.

Pęcherzyki błonowe (ang. Extracellular Vesicles, EVs) to niewielkie obłonione struktury wydzielane przez komórki na drodze egzocytozy lub odpączkowania błony. Badanie wpływu niskotemperaturowego przechowywania EVs przeprowadzono opierając się o analizę ilościową z wykorzystaniem technologii analizy śledzenia nanocząstek (ang. Nanoparticle Tracking Analysis, NTA) oraz analizę fenotypową opierającą się o analizę zawartości RNA oraz ekspresji markerów powierzchniowych, takich jak CD81 i CD90, przy użyciu wysokorozdzielczego cytometru przepływowego. W celach porównawczych wykorzystano trzy frakcje EVs, które zostały wyizolowane z nasączy komórkowych w procesie ultrawirowania .Wyniki analiz pokazały znaczące zmiany spowodowane niskotemperaturowym przechowaniem preparatu EVs, szczególnie spadek ekspresji markera CD90 oraz zwiększenie różnorodności wielkościowej EVs. Znaczącym jest również, że zmiany te nie były analogiczne we wszystkich populacjach EVs.