Analysis of SpvB expression by Salmonella Typhimurium VNP20009 pD881+spvB and Salmonella Typhimurium LT2 pD881+spvB

The SpvB protein limits the formation of actin filaments, leading to the delayed apoptosis. The aim of this study was analysis of SpvB protein production. Expression of SpvB protein was analyzed in the Salmonella Typhimurium and Escherichia coli strains having the pD881 + spvB construct. The production of the SpvB protein by this bacteria is possible due to the induction of the rhamnoside promoter of plasmid pD881 containing the spvB gene. The effects of induction time, as well as inducer concentration on the production of SpvB protein were researched. Also, the growth curves of S. Typhimurium VNP20009 pD881 + spvB were plotted to determine the effect of the pD881 + spvB construct on bacterial growth. The electrophoretic separation of bacterial lysates under denaturing conditions enabled the determination of the production level of the SpvB protein. The staining of polyacrylamide gels using the Coomassie Brilliant Blue indicate that the production of the SpvB protein is very efficient.

Białko SpvB ogranicza tworzenie filamentów aktynowych, co prowadzi do śmierci komórki w wyniku opóźnionej apoptozy. Celem niniejszej pracy było zbadanie poziomu produkcji białka SpvB. Ekspresje białka SpvB analizowano w szczepach bakterii Salmonella Typhimurium oraz Escherichia coli posiadających konstrukt pD881+spvB. Produkcja białka SpvB przez wymienione szczepy bakterii jest możliwa w wyniku indukcji promotora ramnozowego plazmidu pD881 zawierającego gen spvB. W przeprowadzonych eksperymentach zbadano wpływ czasu indukcji oraz stężenia induktora na ilość uzyskanego białka SpvB. Również wykreślono krzywe wzrostu bakterii S. Typhimurium VNP20009 pD881+spvB, w celu określenia wpływu konstruktu pD881+spvB na wzrost bakterii. Przeprowadzony rozdział elektroforetyczny lizatów bakteryjnych w warunkach denaturujących umożliwił określenie poziomu produkcji badanego białka. Wybarwienie żeli poliakrylamidowych z wykorzystaniem barwnika Coomassie Brilliant Blue wskazuje, że produkcja białka SpvB jest bardzo wydajna.