Wpływ związków o aktywności hormonalnej na ekspresję bekliny 1 w jajniku neonatalnej świni

The aim of the research presented in this thesis was to determine the localization and expression of beclin-1 in ovarian tissue of neonatal pigs treated with selected endocrine compounds. Beclin-1 is an important protein involved in the autophagy process. Examining the level of expression, as well as immunolocalization of this protein in the tissue allow for a relative assessment of the intensity of autophagy. During regulation of this process, formation of a protein complex between beclin-1 and the anti-apoptotic Bcl-2 protein is essential, hence the interaction between these two proteins has also been studied. Programmed cell death processes are particularly important in the early stages of ovarian development, when the pool of oocytes available for the rest of the female's life is formed. Compounds of hormonal activity that are absorbed from the environment may disturb development and functions of the reproductive system of female mammals. Therefore, it is important to study the influence of these substances on the processes of atresia occurring in the neonatal female ovary. The subject of the study were ovaries collected from 11-day-old pigs, which were previously injected with one of five synthetic compounds with known hormonal activity (testosterone propionate, flutamide, 4-tert-octylphenol, ICI 182,780 and methoxychlor). Microscopic slides were immunohistochemically stained for the purpose of locating beclin-1 and protein expression analysis was performed for beclin-1 and Bcl-2 using Western Blot method. Additionally, co-immunoprecipitation was performed to demonstrate interaction between the two studied proteins. The research was conducted as part of a research project OPUS 9 aimed at determining the cellular and molecular mechanisms of androgens and estrogens on follicle-regulating processes.

Przedstawione w pracy badania miały na celu określenie lokalizacji oraz ekspresji bekliny-1 w tkance jajnikowej neonatalnych świń poddawanych działaniu wybranych związków endokrynnie czynnych. Beklina-1 jest ważnym białkiem biorącym udział w procesie autofagii. Zbadanie poziomu ekspresji, a także immunolokalizacja tego białka w tkance pozwala na relatywną ocenę intensywności zachodzenia autofagii. Podczas regulacji tego procesu istotne jest utworzenie kompleksu białkowego między bekliną-1 i anty-apoptotycznym białkiem Bcl-2, dlatego skupiono się również na interakcji tych dwóch białek. Procesy programowanej śmierci komórkowej są szczególnie istotne na wczesnych etapach rozwoju jajnika, kiedy kształtowana jest pula oocytów dostępnych przez resztę życia samicy. Pochodzące ze środowiska związki o aktywności hormonalnej mogą zaburzać rozwój i funkcjonowanie układu rozrodczego samic ssaków. Z tego względu istotne jest zbadanie wpływu tych substancji na procesy atrezji zachodzące w jajniku neonatalnej samicy. Przedmiotem badań były jajniki pobrane od 11-dniowych świń, które były wcześniej nastrzykiwane jednym z pięciu syntetycznych związków o znanej aktywności hormonalnej (propionian testosteronu, flutamid, 4-tert-oktylfenol, ICI 182,780 oraz metoksychlor). Wykonano preparaty mikroskopowe, które wybarwiono immunohistochemicznie w celu lokalizacji bekliny-1 oraz przeprowadzono analizę ekspresji bekliny-1 i Bcl-2 metodą Western Blot. Dodatkowo przeprowadzono koimmunoprecypitację w celu wykazania interakcji pomiędzy badanymi białkami. Badania przeprowadzono w ramach projektu badawczego OPUS 9 mającego na celu określenie komórkowych i molekularnych mechanizmów działania androgenów i estrogenów na procesy regulujące folikulogenezę.