Determine the effect of the microenvironment in the action of vitamin C on the process of apoptosis in ovarian cancer cells

Ascorbic acid, a common vitamin to treat colds, has also been used in alternative medicine. More and more frequently, ascorbic acid is being tested for cancer due to its antioxidant properties, the induction of apoptosis and synergistic action with chemotherapeutics. An important aspect of the research was the correlation between the tumor environment and the tumor itself and its impact on a tested substance. This the aim of the study was to determine the effect of the microenvironment in the action of vitamin C on the process of apoptosis in cancer and noncancer epithelial cells. This study focuses on the apoptosis executive enzyme, caspase-3 in not only in tumor OVCAR-3 cell line, but also noncancer HOSEpiC epithelial cells , including one of the elements of the tumor microenvironment, namely CAF – cancer associated fibroblast. Cells were cultured in basal medium or supplemented with CAF send medium and exposed for pure ascorbic acid at concentrations of 0.1 μM, 1 μM, 10 μM, 100 μM, 1000 μM. In the OVCAR-3 and HOSEpiC line the activity of caspase-3 was determined using a fluorescence technique, while protein expression by Western blot. The obtained results showed lack of the effect in the HOSEpiC and decreased caspase-3 activity in CAF supplemented medium. In both type of cancer cells culture vitamin C increases the activity of caspase-3 Western Blot analysis showed no effect on caspase-3 protein expression in both noncancer and cancer cells.

Kwas askorbinowy, jako powszechnie stosowana witamina w leczeniu przeziębień, znalazł również swoje zastosowanie w medycynie niekonwencjonalnej. Coraz częściej, dzięki swoim antyoksydacyjnym właściwościom, indukcji apoptozy i synergistycznemu działaniu z powszechnie stosowanymi chemioterapeutykami, jest badany pod kątem zastosowania w chorobach nowotworowych. Ważnym aspektem badań w przypadku rozwoju nowotworu jest świadomość obecności mikrośrodowiska guza i jego wpływie na zastosowaną terapie, dlatego też celem badań było określenie wpływu mikrośrodowiska w działaniu witaminy C na proces apoptozy w komórkach nowotworowych i prawidłowych jajnika. W niniejszych badaniach skupiono uwagę na enzymie wykonawczym apoptozy, kaspazie-3, zarówno w komórkach nowotworowych jajnika linii OVCAR-3 oraz prawidłowych komórkach epitelialnych jajnika linii HOSEpiC z uwzględnieniem jednego z elementów mikrośrodowiska guza, jakim są fibroblasty otaczające nowotwór (cancer associated fibroblast, CAF). W badaniach zastosowano 2 typy hodowli: w medium podstawowym i medium z dodatkiem pożywki z hodowli CAF. Komórki OVCAR-3 oraz linii HOSEpiC traktowano kwasem askorbinowym w stężeniach: 0,1 μM, 1 μM, 10 μM, 100 μM, 1000 μM. Aktywność kaspazy-3 określono przy użyciu techniki fluorescencyjnej natomiast ekspresje białka metodą Western Blot. Wykazano brak wpływu witaminy C na aktywność kaspazy-3 w komórkach prawidłowych hodowanych w medium podstawowym i obniżenie aktywności kaspazy-3 w hodowanych z medium spod CAF. W komórkach nowotworowych witamina C stymulowała aktywność kaspazy-3 zarówno w hodowlach z medium podstawowym, jak i spod CAF. Nie zanotowano wpływu w obu typach komórek na ekspresję białka kazpazy-3.