Ekspresja i oczyszczanie domeny hKIND1 białka Spire1 oraz testy biofizyczne w celu identyfikacji inhibitorów oddziaływania Spire1-FMN2

Spire1 is one of the actin binding proteins, which taking into account their function, are also called actin nucleators. The KIND domain of Spire1 protein is responsible for binding to formin 2 (FMN2). To date, inhibitors of these two proteins have not been identified, which is why physiological function of the interaction is not entirely recognized. However, taking into consideration characteristics of the two proteins individually, it may be presumed that they are involved in formation and/or metastasis of a tumor. In this thesis, an attempt was made to identify inhibitors of the hKIND1-FMN2 interaction using biophysical assays – TSA and NMR. Employing the Thermal Shift Assay (TSA) method, three potential inhibitors were identified. 2D NMR, however, ruled out interactions between fragments and hKIND1 domain of Spire1 protein.

Spire1 należy do białek wiążących aktynę, które ze względu na swoją funkcję są także nazywane nukleatorami aktyny. Domena KIND białka Spire1 odpowiada za wiązanie z forminą 2 (FMN2). Do tej pory nie zidentyfikowano inhibitorów oddziaływania tych dwóch białek, dlatego też fizjologiczne znaczenie tego kompleksu nie jest do końca poznane. Biorąc jednak pod uwagę charakterystykę białek z osobna, można przypuszczać, że są one zaangażowane w powstawanie i/lub przerzutowanie nowotworów. W niniejszej pracy podjęto próbę zidentyfikowania inhibitorów oddziaływania KIND1-FMN2 wykorzystując metody biofizyczne – TSA oraz NMR. Za pomocą techniki Thermal Shift Assay (TSA) zidentyfikowano trzy potencjalne inhibitory. 2D NMR wykluczył jednak oddziaływanie związków do domeny KIND białka Spire1.