W poszukiwaniu znaczenia kropli lipidowych w aktywowanym śródbłonku - obrazowanie zmian chemicznych z użyciem spektroskopii ramanowskiej i mikroskopii fluorescencyjnej.

The endothelium is a monolayer of cells that covers blood vessels. Due to the endothelium’s unique position in the body, it fulfills many functions, e.g. it maintains the blood system homeostasis and is a physical barrier between the tissues and blood. The endothelium breakage caused by endothelial inflammation leads to endothelial dysfunction, which is the basis of numerous diseases.In this work, endothelial inflammation was triggered by endothelial activating factors: TNF-α, LPS, Ang II, and hypoxia. The spectroscopic and microscopic analysis has uncovered that the lipid droplets’ biogenesis is an integral part of endothelial inflammation. Endothelial inflammation was confirmed by the overexpression of ICAM-1. The lipolysis of lipid droplets induced by the aforementioned factors was ATGL-dependent, hence atglistatin (an ATGL inhibitor) was used. The Raman analysis of lipid droplets has shown that they are rich in highly unsaturated lipids.In this thesis, the pharmacology of the endothelium was examined on the example of empagliflozin during endothelial inflammation stimulated by TNF-α. The results have shown that empagliflozin inhibits the lipid droplets’ biogenesis, and overexpression of ICAM-1 upon the inflammatory state. This indicated that empagliflozin takes part in the inhibition of endothelial inflammation.

Śródbłonek to warstwa komórek wyścielających naczynia krwionośne. Z uwagi na wyjątkową lokalizację w organizmie spełnia wiele funkcji, np. uczestniczy w utrzymaniu homeostazy układu krwionośnego, a także spełnia rolę fizycznej bariery pomiędzy krwią a tkankami. Jego uszkodzenie wywołane stanem zapalnym skutkuje rozwojem dysfunkcji śródbłonka, które są podstawą wielu chorób. W niniejszej pracy stan zapalny wywołano za pomocą czynników aktywujących śródbłonek: TNF-α, LPS, Ang II, oraz w warunkach hipoksji. Analiza spektroskopowa i mikroskopowa wykazały, iż biogeneza kropli lipidowych jest integralną częścią stanu zapalnego śródbłonka. Rozwój stanu zapalnego został potwierdzony nadekspresją molekuły adhezyjnej ICAM-1. Lipoliza kropli lipidowych indukowanych czynnikami aktywującymi śródbłonek była zależna od enzymu ATGL, którego inhibitorem jest atglistatyna. Analiza ramanowska kropli lipidowych w izolowanych naczyniach krwionośnych stymulowanych TNF-α, LPS, Ang II oraz w warunkach hipoksji wykazała, że są one bogate w wysoko nienasycone lipidy.W niniejszej pracy badano także farmakologię śródbłonka na przykładzie empagliflozyny w stanie zapalnym indukowanym TNF-α. Wykazano, że empagliflozyna hamuje biogenezę kropli lipidowych przy jednoczesnym zahamowaniu zwiększonej ekspresji białka ICAM-1 w stanie zapalnym. Oznacza to, iż empagliflozyna bierze udział w hamowaniu stanu zapalnego śródbłonka.