Preparation and optimization of production of two fusion proteins: NHi1-mGFP-His and NHi2-mGFP-His

Receptory GPCR/7TM stanowią istotną grupę receptorów na powierzchni komórek. Po związaniu liganda, aktywują one trimeryczne białka G, które biorą udział w dalszym przekazie sygnału. Białka te są zbudowane z trzech podjednostek: α, β i γ i posiadają aktywność GTPazową. Celem pracy było stworzenie dwóch białek fuzyjnych, złożonych z N-końca (30 pierwszych aminokwasów) podjednostek α1 i α2 (o aktywności hamującej cyklazę adenylową), mGFP oraz metki His. Wybrano N-koniec podjednostki α, ponieważ fragment ten zawiera rejon polizasadowy oraz miejsca acylacji, cechy istotne dla oddziaływania z błoną komórkową, pozostałymi elementami trimeru i dalszymi przekaźnikami sygnału. Konstrukty te mogą posłużyć do badań formowania i mechanizmów działania platform sygnalizacyjnych w błonach komórkowych.

G protein-coupled receptors are an important group of transmembrane receptors. After ligand binding, they activate trimeric G proteins, which participate in further signal transduction. These proteins consist of α, β and γ subunits and possess GTPase activity. The aim of this project was to create two fusion proteins, consisting of the N-terminal fragment of Gαi1 or Gαi2 subunit (adenyl cyclase inhibition activity), mGFP and His-Tag. The N-terminal fragment of α subunit was chosen because it contains a polybasic motif and undergoes lipidation, features which play a key role in the activation and proper interaction with other proteins and plasma membrane. These fusion proteins could be used for further study of signal transduction in cells.