Microcystinase (MlrA) expression in Synechococcus elongatus UTEX 2973 via the conjugation with E. coli transformants produced with the use of CyanoGate technique

Sinice jako organizmy fototroficzne ze zdolnością do produkcji różnorodnych metabolitów mają potencjał do wykorzystania w biotechnologii, m.in. w produkcji rekombinowanych białek. Jednym z takich białek jest mikrocystynaza (MlrA), która umożliwia degradację toksyny sinicowej – mikrocystyny. Celem niniejszej pracy było uzyskanie mutantów szybko rosnącego szczepu sinic Synechococcus elongatus UTEX 2973 za pomocą koniugacji z konstruktami E. coli zawierającymi różne plazmidy z genem mlrA oraz plazmidy pomocnicze. Z 10 planowanych szczepów otrzymano w wyniku koniugacji 7. Uzyskane transformanty zostały zweryfikowane pod względem obecności wstawki oraz aktywności białka MlrA. W dalszej kolejności planowane jest zweryfikowanie poziomu ekspresji MlrA oraz mNeonGreen w uzyskanych szczepach i porównanie go z ekspresją MlrA wcześniej przygotowanych mutantów Synechocystis sp. PCC 6803.

Cyanobacteria, phototrophic organisms with ability to produce a variety of metabolites have a great biotechnological potential, also as hosts for heterologous protein expression. One of such proteins is a microcystinase (MlrA) capable of cyanobacterial toxin – microcystin degradation. The aim of this work was to create mutants of fast growing cyanobacterial species Synechococcus elongatus UTEX 2973 by conjugation with E. coli transformants containing various plasmids with mlrA gene and helper plasmids. 7 out of 10 planned mutants were obtained and the presence of mlrA/mNeonGreen sequence as well as MlrA activity were verified. In the future this will allow to study MlrA expression level in prepared mutants and comparison of MlrA production between these new mutants and previously created mutants of Synechocystis sp. PCC 6803 expressing MlrA.