Porównanie czasów życia ogniska naprawczego XRCC1 oraz ogniska PAR w naprawie jednoniciowych pęknięć DNA indukowanych niebieskim światłem widzialnym

Ścieżka naprawy jednoniciowych pęknięć DNA angażuje wiele białek, w tym XRCC1, czy PARP1, którego funkcją jest wprowadzanie potranslacyjnych modyfikacji, jakimi są łańcuchy PAR. Dzięki PARylacji poprzedzającej rekrutację białka naprawczego XRCC1, możliwa jest naprawa uszkodzenia. W niniejszej pracy zbadano czas życia ognisk PAR oraz XRCC1 w żywej komórce. W tym celu indukowano jednoniciowe uszkodzenia DNA światłem lasera oraz rejestrowano obrazy dwuwymiarowe komórek HeLa, które zostały transfekowane plazmidem z XRCC1 oraz wybarwione przeciwciałami anty-PAR. Z analizowanych danych wynika, że czas życia ogniska PAR jest krótszy niż ogniska XRCC1, przy czym oba foci pojawiają się w mniej niż 50 s po uszkodzeniu. Ponadto, te doświadczenia pokazały, że wykorzystana metoda jest skuteczna i umożliwia badanie ścieżki sygnałowej naprawy jednoniciowych pęknięć DNA.

The single-strand break repair pathway involves dozens of factors, including XRCC1 andPARP1, whose function is introduction posttranslational modifications such as PAR chains. Through PARylation preceding recruitment of repair protein XRCC1, it is possible to repair single-strand breaks.In this study, the lifetime of PAR and XRCC1 foci was examined in living cells. Singlestranded breaks in DNA were induced with laser light and two-dimensional images of HeLa cells transfected with the XRCC1 plasmid and stained with anti-PAR antibodies were recorded. The a analysed data show that the lifetime of a PAR focus is shorter than of XRCC1 focuses, with both foci appearing less than 50 s after SSB. Moreover, those experiments have shown that used method is effective and enables the study of the signal pathway of repairing single-stranded DNA breaks.