Optymalizacja metody barwienia immunofluorescencyjnego komórek zakażonych wirusem herpes simplex typu 1

The herpes simplex virus (HSV-1) is a common infectious agent among humans. The infection is usually asymptomatic or in the form of small mucocutaneous manifestations. However, serious symptoms such as keratitis or encephalitis may occur. Commercially available antiviral agents alleviate the symptoms of the infection and can reduce the number ofclinical recurrences. However, there is no treatment available that completely removes the virus from the body because HSV-1 establish latency in neurons. Therefore, there is a need for further research on the HSV-1 that may lead to development of effective therapies. In the conducted experiments, optimization of the immunofluorescence staining method of cells infected with HSV-1 was performed. 5% BSA and 5% human serum have been shown to be the most effective blocking buffers. Obtained results allowed for the use of optimized staining to determine the number of infected telomerase immortalized gingival keratinocytes. Currently, gingival keratinocytes are implemented as a culture model for HSV-1 infection at the Department of Microbiology at the Faculty of Biochemistry, Biophysics and Biotechnology ofthe Jagiellonian University.

Wirus opryszczki pospolitej typu 1 (HSV-1) jest powszechnie występującymczynnikiem infekcyjnym wśród ludzi. Zakażenie najczęściej przebiega bezobjawowo lub uwidacznia się w postaci drobnych zmian w obrębie błon śluzowych. Mogą jednak wystąpić poważne objawy, takie jak zapalenie rogówki czy mózgu. Dostępne na rynku leki przeciwwirusowe łagodzą objawy infekcji i mogą zwiększyć okresy między nawrotami choroby. Nie ma jednak dostępnego leczenia, które całkowicie usuwa wirusa z organizmu, ze względu na jego obecność w stanie latencji w neuronach. Istnieje zatem konieczność dalszych badań nad wirusem HSV-1, w celu opracowania skutecznych terapii. W wykonanych doświadczeniach przeprowadzono optymalizację metody barwienia immunofluorescencyjnego komórek zakażonych wirusem HSV-1. Wykazano, że najskuteczniejszymi buforamiblokującymi są 5% BSA oraz 5% surowica ludzka. Uzyskane wyniki pozwoliły na zastosowanie zoptymalizowanej metody barwienia do oznaczenia stopnia zakażenia unieśmiertelnionych, ludzkich keratynocytów dziąsłowych. Eksperymenty z wykorzystaniem tego typu komórek w badaniach nad wirusem opryszczki pospolitej typu 1 są obecnie prowadzone w Zakładzie Mikrobiologii na Wydziale Biochemii, Biofizyki i Biotechnologii UJ.