Badanie apoptozy komórek czerniaka oka indukowanej cisplatyną i tunikamycyną - analiza aktywacji kaspaz

The aim of this study was to analyze the effects of tunicamycin and cisplatin on caspase expression and activation, and subsequent uveal melanoma cells apoptosis. Human uveal melanoma 92.1 cell line was incubated with tunicamycin and cisplatin. Cell viability was tested in the Alamar Blue test. The relative intensities of the protein bands for initiating caspase-9 and effector caspase-3 were also studied to analyze activation of the intracellular apoptotic pathway. It has been shown that although cisplatin reduces cell viability, it does not increase protein expression for caspase-9 or -3. In an analysis of the synergistic effect of cisplatin and tunicamycin, the decrease in the viability of cancer cells was more significant than in cells treated with cisplatin alone, but less than in cells treated with tunicamycin alone at the same dose. Thus, in this study it was shown that tunicamycin used synergistically with cisplatin increases the sensitivity of cancer cells to the action of cisplatin, but it has not been confirmed that it is the caspase-dependent apoptosis. Further research is required to understand better the processes of tunicamycin and cisplatin-induced apoptosis

Celem niniejszej pracy jest badanie wpływu tunikamycyny i cisplatyny na apoptozę komórek czerniaka oka oraz analiza aktywacji kaspaz. W tym celu wykorzystano komórki linii 92.1 ludzkiego czerniaka błony naczyniowej oka i inkubowano je z tunikamycyną i cisplatyną. Żywotność komórek zbadano w teście Alamar Blue. Zbadano także względną intensywność prążków białkowych dla inicjatorowej kaspazy-9 oraz efektorowej kaspazy-3 w celu analizy aktywacji wewnątrzkomórkowego szlaku apoptotycznego. Wykazano, że cisplatyna choć obniża żywotność komórek to nie powoduje zwiększenia ekspresji białka dla kaspazy-9 czy -3. Dlatego zaproponowano, że w tym wypadku śmierć komórkowa może być indukowana na drodze niezależnej od kaspaz np. przy aktywnością kalpain. Obniżenie żywotności komórek rakowych spowodowane synergistycznym wpływem cisplatyny i tunikamycyny było większe, niż w komórkach traktowanych samą cisplatyną, natomiast mniejsze w porównaniu do komórek traktowanych samą tunikamycyną w tej samej dawce. A więc w tej pracy pokazano, że tunikamycyna stosowana synergistycznie z cisplatyną zwiększa wrażliwość komórek rakowych na działanie cisplatyny, jednak nie potwierdzono, że jest to apoptoza zależna od kaspaz. W celu lepszego poznania procesów prowadzących i zachodzących podczas apoptozy indukowanej tunikamycyną i cisplatyną wymagane są dalsze badania