Preparation of a genetic construct enabling live-cell imaging of P-bodies

P-bodies are non-membrane-bound cytoplasmic structures composed of RNAs and proteins. P bodies contain transcripts that are translationally inactive, as well as proteins involved in mRNA degradation and silencing, among other functions. With advancing research on P bodies, additional molecules are being discovered as constituents of these structures, such as proteins responsible for epigenetic modifications. P-bodies are involved in post transcriptional regulation and cellular responses to stress conditions. Fluorescence microscopy is an important tool for studying P-bodies as it allows for the observation of these structures within cells. The objective of this study was to create a genetic construct enabling live-cell imaging of P bodies. The introduced construct allowed the expression of a fusion protein, Clover-DCP1A, serving as a fluorescent marker for P-bodies in living cells.

Ciałka P (ang. P-bodies) są to nieobłonione cytoplazmatyczne struktury, które składają się z RNA oraz białek. W ciałkach P znajdują się transkrypty, które są nieaktywne translacyjnie oraz białka, które są zaangażowane między innymi w degradację i wyciszanie mRNA. Wraz z postępem badań nad ciałkami P odkrywane są kolejne cząsteczki, które wchodzą w skład tych struktur na przykład białka odpowiedzialne za modyfikacje epigenetyczne. Ciałka P są zaangażowane w regulację potranskrypcyjną, a także odpowiedź komórek na warunki stresowe. Ważnym narzędziem do badań nad ciałkami P jest mikroskopia fluorescencyjna, która pozwala na obserwację tych struktur in situ w żywych lub utrwalonych komórkach. Celem niniejszej pracy było stworzenie konstruktu genetycznego pozwalającego na przyżyciową obserwację ciałek P w komórkach. Wprowadzony do komórek konstrukt umożliwia ekspresję białka fuzyjnego Clover-DCP1A, które stanowi znakowany fluorescencyjnie marker ciałek P w żywych komórkach.